抗PD-1PD-L1治疗肿瘤的新机制：促进巨噬细胞
程序性细胞死亡蛋白1（PD-1）是免疫检查点，在激活的T细胞中表达上升，能够免疫耐受。在肿瘤细胞表面常高表达其配体PD-L1，通过与PD-1结合使肿瘤细胞逃脱机体的免疫杀伤。
在肿瘤微中，PD-1不仅能T细胞的免疫功能，还能B细胞、NK细胞和DC细胞的功能。近年研究发现，巨噬细胞在病原刺激下也有PD-1的表达，并且与巨噬细胞极化相关，但在肿瘤相关巨噬细胞TAM中有无PD-1的表达呢？其PD-1在肿瘤中又发挥怎样的作用呢？
Gordon等对此展开研究，取得了重要进展，结果发表于《Nature》。荷叶在此与大家分享该文章。
第一步：建立CT26结肠癌小鼠皮下荷瘤模型，FACS和免疫荧光染色的方法分析了TAM上PD-1的表达，发现50％以上的TAM表达PD-1，并且随着荷瘤时间的延长，PD-1＋TAM的比例逐渐增高。
第二步：通过骨髓移植实验分析PD-1＋TAM的来源。具体为：RFP＋小鼠骨髓移植给射线照射的GFP＋小鼠，在该嵌合体小鼠上建立MC38结肠癌皮下荷瘤模型。结果发现，与肿瘤浸润的淋巴细胞（TIL）一样，PD-1＋TAM主要来源于RFP＋骨髓细胞。
第三步：PD-1＋TAM的表型特征分析。具体为：通过FACS的方法分选肿瘤中PD-1＋TAM，Giemsa染色见其胞体大，透射电镜显示胞浆中含较多的物质和溶酶体（提示消化能力下降）。
分析了PD-1＋TAM的M1/2极化状态，结果显示，PD-1＋TAM主要呈“促肿瘤”的M2极化状态。
第四步：体外、体内实验检测PD-1＋TAM的能力。分选的肿瘤中PD-1ˉ和PD-1＋TAM，体外比较其GFP金葡菌的能力，可见PD-1＋TAM细菌的能力下降。
进一步在CT26/YFP＋荷瘤小鼠上研究体内实验，发现PD-1＋TAMYFP＋肿瘤的能力明显降低。当敲除肿瘤细胞的PD-L1后PD-1＋TAM能力明显增强。
第五步：抗TAM的PD-1/PD-L1对结肠肿瘤的影响。为了排除其他免疫细胞的影响，选择T，B，NK细胞发育或功能缺陷的NSG小鼠接种肿瘤；为了排除肿瘤细胞自身表达的PD-1对抗PD-1抗体治疗起反应，选择不表达PD-1的人结肠癌DLD细胞，且DLD细胞过表达PD-L1（以便激活TAM上的受体PD-1）。
结果发现抗PD-1或抗PD-L1（HAC）治疗能显著肿瘤的生长，且这些作用依赖于TAM。同时抗PD-L1（HAC）联合抗CD47（巨噬细胞识别同类和异类的关键）治疗，能协同肿瘤生长和延长荷瘤小鼠的时间。
2、回答“”来源”问题——PD-1＋TAM来源于卵黄囊的定居巨噬细胞还是来源于骨髓单核细胞？
4、提出并验证——提出PD-1影响巨噬细胞的能力，实验验证，体内抗PD-1/PD-L1治疗肿瘤。
PD-1免疫检查点和TAM都是肿瘤研究的热点，作者研究发现进一步完善了PD-1的功能：PD-1不仅T、B和NK细胞，还能肿瘤巨噬细胞的功能，填补了一块研究空白，对临床抗PD-1治疗有指导意义。
①作者排除T、B、NK细胞的作用之后认为主要是TAM发挥作用，但是一些肿瘤中髓系来源的细胞如MDSC是否存在PD-1/PD-L1的表达，它们是否影响肿瘤治疗的效果？
②在研究能力时，作者将肿瘤细胞PD-L1敲除，发现PD-1＋TAM能力增强，没有以抗PD-1抗体处理观察其能力的变化，稍显薄弱。
③只有PD-1＋TAM的电镜图片，无对照PD-1ˉTAM的，作者发现PD-1＋TAM含有较多的溶酶体和体，那么为什么其GFP＋细菌或YFP＋肿瘤细胞的能力减弱呢？是消化能力弱？
④文章仅采用皮下荷瘤模型分析，荷叶认为需要添加原位荷瘤模型，特别是验证PD-1＋TAM来源时。
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